조직 검사학 3막

Salmonella와 Shigella 균의 운동성과 오르니틴 분해능을 보자.
M IO 배지, Salmonella, Shigella, nettle(백금 이X), 알코올램프
①배지 윗부분 멸균 후 M IO 배지에 멸균된 nettle로 균을 따서 천자배양 한다.
(그대로 배지를 수직으로 찔렀다가 빼기-벽면에 묻지 않게 주의!)
②마개를 닫고 사용한 nettle은 알코올램프로 멸균한다.
③하루 동안 배양한다.
                             

 
Salmonella: 혼탁한 모습을 보임 (운동성을 나타냄)
혐기적 환경에서: Ornithine+Glucose+BCP 시약+Salmonella 세균 → purple(양성)
Shigella: 찔러넣은 부분만 좀 뿌옇게 보이고 혼탁한 모습을 보이지 않음(편모 없음)
혐기적 환경에서: Ornithine+Glucose+BCP 시약+Shigella 세균 → Yellow(음성)

*장내세균의 모든 군종은 glucose를 발효하므로 이 배지는 산성이 된다.
그래서 예비 반응으로 Yellow를 띄게 되는데 Decarboxylase(탈탄산 분해효소) 양성 세균은 다시 알칼리로 변화시켜 BCP 시약은 이때 보라색으로 변하여 혼탁한 자색으로 베이지색이 변하게 된다면 양성이 되는 것이다. 한편 알칼리화되지 않으면 산성 그대로 유지되어 베이지색은 황색이다.


TSI 배지에서 Glucose, Lactose, Sucrose 분해능과 황화수소(H2S) 능력을 본다.
TSI 사면배지, E.coil, Salmonella typhimurium, Shigella 탄성,
Pseudomonas aeruginosa, 백금이, 알코올램프
①사면배지 윗부분을 살짝 가열한다. (잡균과 습기 제거)
②멸균한 백금이로 균 집락을 따 1cm 띄우고 구불구불하게 접종한다.
③사용한 백금이는 알코올램프에 멸균시키고 하루 동안 배양한다.
                             

 
위의 실험 TSI 배지는 Dextrose(=glucose), Lactose, Sucrose 분해를 볼 수 있는 배지이며 Tube 아래는 glucose, 윗부분은 Lactose와 Sucrose 분해를 보는 것이다. TSI 배지 안에는 Phenol red 지시약이 들어가 있어 분해하게 되면 산이 만들어지는데 이때 황색을 띠게 되고 비분해 시 그대로 적색이 남아있게 된다. 또한, TSI 배지는 황화수소 능력을 볼 수 있으며 황화수소 생성이 되었을 시 배지에서 검은색을 나타내게 되는데 위 실험 중 황화수소를 만들어 내는 것은 Salmonella밖에 없었다. 또한, Salmonella에서 glucose 분해능을 볼 수 있는 tube 아랫부분이 사진상으로는 붉게 보이기도 했지만 직접 보았을 때 주황에서 노란빛을 띠었기 때문에 발효가 되었다고 보며 균을 접종할 때 1cm 띄어서 접종을 한다는 것을 주의해야 한다.



Salmonella, Shigella, Providencia 등 그람음성 간균 분리 및 감별
X LD 배지, Salmonella, Shigella, 백금이, 알코올램프
①X LD 배지에 멸균된 백금이로 균 집락을 따서 streaking 한다.
②사용한 백금이는 알코올램프로 멸균시킨다.
③하루 동안 배양시킨다.
            Salmonella                            Shigella
        검은색 집락-H2S 생성                        H2S 생성 X
     Lactose, Sucrose 비분해             Lactose, Sucrose 비분해
X LD 배지에는 Lactose와 Sucrose가 들어가 있는데 이를 발효하게 되면 Phenol red에 의해서 산을 생산하여 황색으로 바뀌게 된다. 그러나 Salmonella와 Shigella 는 Lactose와 Sucrose를 발효하지 않기 때문에 색은 변화가 없으며(적색) Salmonella는 H2S를 강하게 생성하기 때문에 검은색 집락으로 자라며 검은색 집락 주위의 분홍색을 띠게 되는데 이는 Lysine 양성을 나타낸다. (LDC+)
(즉 세균과 조직 검사할 양성을 의미)
*그러나 Salmonella 단백질과 탄수화물 A는 예외적으로 단백질 분해하지 않고 Lysine을 비 분해한다. 또한, H2S도 생성하지 않아 선홍색 집락을 나타낸다.

Shigella 는 H2S 생성을 하지 않고 Lactose, Sucrose를 비 분해하기 때문에 선홍색 집락을 나타내며 X lose 음성이고 이는 Lysine 음성을 의미한다.


장구균인 칼슘 동정
SF 배지, incubation or overnight, 백금이, 알코올램프
(1) SF 배지에 한쪽에는 화염 멸균한 백금이로 백신 접종하며 한쪽 액체배지에는 접종하지 않는다.
(2) 사용한 loop은 알코올램프로 화염 멸균한다.
(3) SF 배지를 35°C에서 incubation or overnight로 하룻밤 배양한다.
양성:백신중 강한 것으로 한다. (노랑) 음성:접종하지 않음(보라)
SF 배지에는 sodium 세포 들어가 있어 단백질 발육되고 다른 균은 발육을 억제하는 역할을 한다. 이 배지에 균을 접종한 후 35°C 부란기에서 하루 동안 배양하면 세균이 증식 시 포도당을 발효하는데 산성이 되어 BCP 지시약이 purple에서 yellow(황색)가 되는 결과를 볼 수 있다. 이러면 SF 발육 양성이라고 하지만 위 실험에선 한쪽 액체배지에는 균을 접종하지 않았다. 균을 접종하지 않은 곳에는 변화 없는 지시약은 본래의 색 보라색이 나타나게 되며 그 이외의 균 group D streptococcus (S.Boris)는 음성(보라색)을 나타내며 SF 실험은 탄수화물 동정에 좋은 실험 중 하나라고 할 수 있다.