미생물 조직 검사학 실습 보고서

오늘은 Gram-간균 중 장내세균 시험을 해보자
API 20E kit, 증류수, loop, 알코올램프, 파스퇴르 파이 애완견, No. 1 McFarland, 미네랄 기름 vulgaris, Shigella Sonnie
①증류수를 tray에 5 ml 정도 주입(말라버리는 걸 방지하고 수분 유지를 위해)
②엄지로 앰풀을 연다. (사용하기 전에 미리 실온에 꺼내놓기)
③집락을 1개씩 따서 저어주며 No. 1 McFarland가 되게 표본에 균을 접종한다.
(No. 1 McFarland만 들기? 1% BaCl2를 0.1mL + 1% H2SO4를 9.9mL mix)
④파스퇴르 파이 애완견으로 꾸러미 홈에 주입하는데 약간 세운 후 벽면 쪽으로 거품이 생기지 않게 주입한다. 
- CIT tube와 cu pule까지 곤액을 채우고 다른 것은 tube까지만 채운다. DAH 미네랄 기름을 cu pule에 채워 혐기적 상태 만들어줄 것!)
⑤36°C에서 하루 동안 배양시킨다.
⇒▲LGU(glucose)가 음성이면 다시 하루 더 배양할 것. 그 이유는 장내세균이 포도당을 발효하여 당을 이용하기 때문. 그러나 LGU가 양성이라면 TDA에 ferric chloride 1d ROP, ONP oxidase 시약을 1방울씩 넣기.
∴TDA-tryptophan deaminase test/ONP-oxidase test
⑥IND에는 K ova 시약(Jame 시약) 1방울, VP에는 α-칼슘 40% KOH 1방울씩.
질산염을 보고 싶을 땐 산성 acid와 alpha-기름 각각 2방울씩 넣고 음성이 나온다면 아연분말을 조금 넣는다.
⑦카탈라아제 test는 MAN 1.5%와 산화수소를 한 방울 넣는다.
⑧반응을 보고 판독 표 작성 후 에이피아이 웹에서 결과 작성하여 균을 확인한다.

Biochemical test
Saline 용액에 시험 균을 현탁
→건조된 기질이 들어있는 kit의 cu pules에 접종하여 배양 후 발색시약을 첨가하여 물질의 대사 여부를 색 변화로 판정

*API kit 선택법
카탈라아제, 홀씨, 운동성, 옥시다아제 등의 유무로 꾸러미 선정
-API 20E? Gram-간균 중 장내세균 동정용 kit
         23종류 biochemical test 이용
         거품이 생기지 않도록 주입할 것!!!
예) ONP 글자만 표기된 경우⇒ tube까지 균 현탁액 첨가
   DAH 글자에 밑줄⇒ Cu pule에 mineral oil 첨가, tube에 균 현탁액 첨가
    GEL 글자에 표시⇒Cu pule까지 균 현탁액 첨가
API 20E kit
▲배양 후 Strip의 test 결과 확인
 LGU를 포함하여 Test 결과가 3가지 test 양성이면→ TDA test, VP test, IND Test에 시약을 첨가
 LGU를 포함하여 양성인 결과가 3가지 이상 나오지 않으면 시약을 떨어뜨리지 않고 24시간 더 배양한다. → 시약첨가

TDA test (tryptophan deaminase test)
 TDA 시약 1 drop 첨가→reddish brown color 양성
실전 test (Voss 실제 test)

→10분 후 pink or red color 양성 
 VP 1 시약을 1 drop 첨가
 VP 2 시약을 1 drop 첨가             
인도 test (Indole production test)
 ☆맨 마지막에 test를 한다 → gas가 생성되기 때문
(다른 test의 판독에 영향을 미칠 수 있으므로 시약을 떨어뜨린 후 tray 뚜껑을 덮으면 안 된다.
JAMES 시약을 1d ROP 첨가→ cu pule이 pink color 양성

ONP test
Galactoside permease - Lactose를 세균 안으로 혼입하게 해주는 효소
β-Galactosidase - Lactose 분해. Galactose + Glucose
                 갈락토스와 α-nitrophenol과 만나 노란색으로 발색
☆α-nitrophenol-β-D-세포 (ONP)
 Lactose와 구조가 비슷한 유사체
ONP test
-Lactose를 빠르게 분해하는 세균
-Lactose를 천천히 분해하는 세균     양성: Neisseria 배군
                                         Citrobacter 박사
                                         Shigella Sonnie
-Lactose를 비분해서 하는 세균          음성: Salmonella 세균
                                         Shigella SPP.

 * 최종 Strip의 결과를 에이피아이 웹에서 결과 작성하여 균을 확인
이렇게 오늘은 미생물 실습 검사를 알아보았다.
이번 실험을 통해 알게 된 건 미생물 조직 검 사학은 어렵고 다가가기 어려운 학문이지만 한편으로는 정말 흥미롭고 세상에 이로운 학문이라는 것이다.
특히 코로나 이후 세균, 바이러스에 여러 흥미가 생긴 요즘 이러한 학문이 발달할수록 인류 사회의 큰 도움을 줄 것이라 확신한다.
나 또한 집에서 컴퓨터 게임만 할 것이 아니라 운동 특히 수? 을 열심히 하면서 기초체력을 기르고 이러한 학문을 지속해서 공부하고 학습하여 더 나은 사회가 오도록 최선을 다해야겠다. 그래서 오늘 운동하고 오는 동안 단백질 음료수를 마시기도 했다. 이러한 음료수의 단백질은 나의 근육을 더 크게 만들 것이다. 경제학도 재밌고 조직 검사학도 재밌다. 이런 병리학을 정말 잘하는 내 여자친구가 자랑스럽고 사랑스럽다. 나도 열심히 공부해서 큰 사람이 되어야지. 오래된 생각이다. 다음 글은 더 나은 정보로 찾아가겠다. 세균을 알아내서 인류의 큰 도움이 되자